Chambers começou sua carreira de ator com um papel recorrente na novela Another World, e fez sua estréia no cinema com um papel de apoio no drama de comédia de 1999, Liberty Heights. Seu papel de descoberta em 2005, quando ele foi escolhido como o Dr. Alex Karev na série de drama médico ABC Grey's Anatomy. Chambers ganhou reconhecimento generalizado como a série progrediu eo personagem tornou-se um dos mais populares da série hit, ganhando várias indicações no People's Choice Awards e um Screen Actors Guild Award.
Chambers nasceu em Springfield, Ohio, em 11 de julho de 1970 para Pamela Sue (Willman) e John William Eugene Chambers II, que eram ambos vice-xerife. Chambers foi criado em Springfield e cresceu, ele aspirava a ser um dentista. Ele tem um irmão gêmeo fraterno, Jason; Um irmão mais velho, John Jr. (Chip); E duas irmãs mais velhas, Mia e Susan. Chambers e seu irmão gêmeo foram hospitalizados freqüentemente como crianças devido a ataques freqüentes de pneumonia. Frequentou a High School de Southeastern em Charleston sul, Ohio, e moveu-se mais tarde para New York, onde estudou por quatro anos em Estúdio de HB e estúdios de Ron Stetson.
Chambers foi descoberto por um explorador de modelagem no Metro e passou a estrelar campanhas publicitárias para a gama de fragrâncias de Calvin Klein. Ele trabalhou em toda a Europa, Japão e Estados Unidos para Calvin Klein, Armani e Dolce & Gabbana. Depois de decidir sobre uma carreira de ator, ele se mudou para Nova York no início dos anos 90, onde estudou no HB Studio. Studios e Ron Stetson Studios por quatro anos. Seu primeiro grande papel atuante veio no vídeo musical "Ants Marching" de Dave Matthews Band em 1995. Ele passou a ter alguns papéis na televisão, incluindo o papel recorrente na novela Another World como Nicholas Hudson e New York Undercover. Em 1998 ele foi lançado como regular da série na curta-metragem de curta duração da CBS Four Corners. Chambers também apareceu em vários filmes de televisão, como Harvest of Fire, Rose Hill e Seasons of Love.
Chambers estrelou em vários filmes, notadamente Liberty Heights (1999, como Trey, ao lado de Adrien Brody), The Wedding Planner (2001, como Massimo, ao lado de Jennifer Lopez), O Mosqueteiro (2001), Southern Belles (2005), The Zodiac ), E o HBO filme original Hysterical Blindness (2002). Em 2003, as câmaras foram moldadas como uma das ligações no drama do crime de CBS o caso frio mas saiu após ter aparecido em somente quatro episodes.
Em agosto de 2004, Chambers foi escolhido como o estagiário cirúrgico Alex Karev na série de drama médico de Shonda Rhimes, Grey's Anatomy, em frente a Ellen Pompeo, Sandra Oh, Katherine Heigl e T. R. Knight. Em 2006, juntamente com outros membros do elenco, ele foi premiado com um Screen Actors Guild Award por Desempenho Notável por um Ensemble em uma Série Drama. Em 2009, ele também estrelou como convidado o spin-off da Grey's Anatomy, Private Practice, para o evento de crossover Grey's Anatomy / Private Practice.
Em 1993, casou-se com Keisha Chambers, um antigo booker de agências de modelos. Os dois se conheceram enquanto Chambers estava trabalhando para campanhas publicitárias para Calvin Klein e Keisha estava trabalhando em uma agência de modelos. Eles têm cinco filhos juntos, Isabella (dezembro de 1994), os gêmeos Maya e Kaila (junho de 1997), Eva (março de 1999) e Jackson (janeiro de 2002). Eles adotaram dois cães de resgate e possuem um beagle.
Chambers está envolvido com a Igreja Cristã Pentecostal sem fins lucrativos Dream Center de missão de Los Angeles. No final de janeiro de 2008, ele admitiu que ele sofria de um distúrbio do sono biológico, e tinha verificado se em Los Angeles UCLA Medical Center para tratar a exaustão após um período de apenas duas horas de sono por semana. Chambers segue um estilo de vida saudável e práticas de ioga quente.
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